全国100所名校单元测试示范卷高三物理新2021

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31.(10分(1)RNA(1分)反转录酶和Taq酶(2分)(2)在两种引物的5′端分别添加限制酶NdeI和限制酶HindⅢ的识别序列(3分)(3)DNA连接酶(1分)卡那霉素(1分)能在含卡那霉素的培养基上生长的大肠杆菌,一种导入的是普通质粒,一种导入的是含E基因的重组质粒(2分)【解析】(1)反转录的模板为病毒的RNA.反转录和PCR使用的酶分别为反转录酶和Taq酶(2)为保证目的基因与载体正确连接,需用两种限制酶分别切割载体和目的基因。所选用限制酶的识别位点要位于载体上的启动子和终止子之间,而 EcoR I在载体上有两个识别位点,不能用,所以只能选择NdeI和HindⅢ。又因为该种病毒的E蛋白基因内部及两侧没有Ndel和HindⅢ对应的序列,所以设计PCR的引物时需要在两种引物的5′端分别添加限制酶NdeI和限制酶Hind的识别序列(3)连接目的基因和载体的是DNA连接酶。大肠杆菌作为受体细胞需先用Ca2处理成为感受态细胞因为载体上有卡那霉素抗性基因,所以要把大肠杆菌培养在含卡那霉素的培养基上进行选择。因为导入含E基因的(重组)质粒和导入不含E基因质粒的大肠杆菌都含卡那霉素抗性基因,在含卡那霉素的培养基上都能生长,前者含有E蛋白基因,后者没有,所以在选择培养基上生长的大肠杆菌不都含有E蛋白基因。,更多内容，请微信搜索关注。