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非选择题1.(15分,除标注外,每空2分)(1)多(2)磷酸二酯键DNA连接酶(3)A、B、D(4分)(4)①生长素和细胞分裂素(3分)【解析】(1)DNA分子中A一T之间有2个氢键,G一C之间有三个氢键,故该结构中碱基对A一T的比例多,DNA分子不稳定,利于DNA分子的解螺旋。(2)限制酶切割的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键;基因表达载体的构建除限制酶参与外,还需要DNA连接酶的参与。(3)将上述切开的质粒与目的基因混合,加入DNA连接酶连接后,导人受体细胞的可能有重组质粒或不含目的基因的质粒或不含有质粒。BamH I和Sa3AI都会破坏质粒上的Y抗性基因。若受体细胞含有不含目的基因的质粒,不含目的基因的质粒上含有X和Y抗生素抗性基因,故受体细胞可能抗X和抗Y;若受体细胞含有重组质粒,重组质粒含有X抗生素抗性基因,所以受体细胞可能抗X而对Y敏感(不抗Y);如果受体细胞不含有质粒,受体细胞两种抗性都没有。故选A、B、D项。(4)图3中①将目的基因导入受体细胞,发生了基因重组,故基因重组发生在图3中①;图3过程②、③表示的是植物组织培养过程,该过程中需要调控好生长素和细胞分裂素的比例,两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。
2.(15分,除标注外,每空2分)(1)T4DNA连接酶(1分)(2)PCR Tag酶(热稳定DNA聚合酶)构建基因表达载体与EcoR I切割产生的DNA片段末端相同(3)T-DNA Ti质粒上只有T-DNA片段能够整合到受体细胞的染色体上分子杂交技术中账合【解析】(1)基因工程中,构建基因表达载体时需要使用限制酶和DNA连接酶,DNA连接酶中的TDNA连接酶既可以连接黏性末端,又可以连接平末端。(2)利用PCR技术可以在短时间内获得大量的目的基因,需要热稳定DNA聚合酶(Taq酶)的催化,基因工程的核心步骤是构建基因表达载体;根据题意分析,质粒运载体用EcoR I切割,而另一种酶也可以,则该酶与EcoR I切割产生的DNA片段末端相同。(3)利用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞,由于农杆菌的Ti质粒上只有T-DNA片段能够整合到受体细胞的染色体上,所以构建重组质粒时,应该将目的基因和标记基因都插入质粒的T-DNA片段内;检测目的基因表达产生的mRNA应该用分子杂交技术。