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32.(10分,除标注外,每空2分)(1)原核(1分)切割外源DNA,保证自身安全(1分)(2)磷酸二酯键(1分)变性、复性、延伸(1分)引物与两条模板DNA单链结合(3)③④(4)D【解析】(1)步骤1用的EcoR1是一种限制醉,主要存在于原核生物中,它能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,进而在特定部位将双链DNA切开,显然限制酶在原核生物中能切制外源DNA,保证自身安全。(2)步骤Ⅱ用的是DNA连接酶,DNA连接再催化形成的是磷酸二酯键,即催化相邻核苷酸之间的3'-经基与5'-磷酸间形成磷酸二酯键:P℃CR循环包括变性、复性和延伸三步,该过程中升温到95℃是为了使DNA变性解旋,进而获得DNA单链,其中第二步复性是指引物与两条模板DNA单链结合,进而为后续的延伸做准备。(3)由于DNA聚合酶只能从5‘→3'方向催化了链延伸,根据碱基互补配对原侧可知,引物①是以月的基因下边一条链的左端为模板向右侧延伸,引物②是以目的基因上边一条链为模板的右端向左侧延仲,引物③是以目的基因下边那条链的右端为模板向右侧延仲,引物①是以目的基因上边那条链的左端为模板向左侧延伸,本题的目的是要扩增已知序列两侧的未知序列,因此,应该选择引物③和④。(4)以下选项中,A、BC都是已知序列,只有D是未知序列,而要测定的是未知序列,故选D。
18.D【解析】过程①表示基因表达载体的构建过程,即形成重组T质粒的过程,需要使用限制性核酸内切南和DNA连接酶,但是不需要纤维素酶和果胶藓,A错误:过程②是将目的基因导人受体细跑的过程,在将重组Ti质粒导人姻草细胞前需要先使用CaCl2处理农杆菌,B错误:过程③④为再分化成植株的过程,该过程中需要通过调节营养物质和植物生长调节剂的适当配比,从而实现由@伤组织诱导出芽和根的日的,并由此再生出新植株,C错误:对转基因抗虫烟草的检测,可通过进行个体水平的检测判断转基因是否成功,即让害虫吞食转基因烟草,观察害虫的存活情况进行判断,D正确。