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25.B【解析】构建基因表达载体时,需要用同一种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体,①符合题意;运载体要具有某些标记基因,便于筛选含有重组DNA分子的受体细胞,②符合题意;基因表达载体的构建过程不需要RNA聚合酶,③不符合题意;基因表达载体的维成中包括目的基因启动子、终止子,④⑥⑦符合题意;构建基因表达载体时,需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子,⑤符合题意。故选B,更多内容,请微信搜索关注。